1 方法概述：
本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數來判定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
2 所用的儀器和設備
2.1 高壓消毒鍋使用時應嚴格按照儀器說明書操作。
2.2 恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度進行校驗。
2.3 培養(yǎng)皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
2.4 普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基的準備及滅菌見附件A
3 測試步驟
3.1 采樣方法
將已制備好的培養(yǎng)皿，按潔凈室沉降菌采樣點布置圖的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基面暴露30分鐘（靜態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
3.2 培養(yǎng)
3.2.1 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3.2.2 在30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。
3.2.3 每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
3.3 菌落計數
3.3.1 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。
3.3.2 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。
4 注意事項
4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性，準確性。
4.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。
4.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數做詳細的記錄。
4.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
4.5 采樣前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現變質，破損或污染的應剔除。
5 測試規(guī)則
5.1 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速控制在規(guī)定值內。
5.1.2 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區(qū)）已經過消毒。
5.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。
5.2 測試人員
5.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
5.2.2 靜態(tài)測試時，室內測試人員不得多于二人。
5.3 測試時間
5.3.1 對單向流，測試應在凈化空調系統(tǒng)運行不少于15min 后開始。
5.3.2 對非單向流，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
5.4 沉降菌計數
5.4.1 采樣點數目及其布置
最少采樣點數目如下表
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面 積
m2
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潔 凈 度 級 別
|
|
A
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B
|
C
|
D
|
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<10
≥10-<20
≥20-<50
≥50-<100
≥100-<200
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2-3
5
8
16
50
|
2-3
5
8
16
50
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2
2
2
5
10
|
2
2
2
2
3
|
|
注：表中的面積，對于單向流潔凈室，是指送風面面積。對于非單向流潔凈室是指房間的面積。
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在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數見下表
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潔凈度級別
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所需Ф90mm培養(yǎng)皿數（以沉降30分鐘計）
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A、B
C
D
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14
2
2
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采樣點的布置
工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。
可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。采樣點位置的詳細規(guī)則見附件B。
房間采樣點超過10個點，每7天對所有采樣點輪流監(jiān)測一次。
5.5 記錄
監(jiān)測記錄中應記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態(tài)。
5.6 結果計算
5.6.1 用計數方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數。
5.6.2 平均菌落數的計算，見式（1）。
式(1)
式中：m 平均菌落數；
m1 1號培養(yǎng)皿菌落數；
m2 2號培養(yǎng)皿菌落數；
mn n號培養(yǎng)皿菌落數；
N 培養(yǎng)皿總數。
5.7 結果評定標準：
靜態(tài)：
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潔凈度級別
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微生物（沉降菌）最大允許數
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潔凈度級別
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微生物（沉降菌）最大允許數
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